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实验案例
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研磨仪研磨动物器官组织的实验步骤
发布时间:2017-05-17 点击: 次   编辑:admin

实验步骤

每50~100mg 组织加入0.2体积 TRIzol

1.加钢珠1颗,设置研磨仪参数:12单位振频,1min,每种样品基本充分匀浆

2. 将上述匀浆液每0.2体积 TRIzol 试剂用量的匀浆液中加入0.04体积氯仿,盖紧管盖,手动剧烈震摇15 秒钟,然后室温静置2~3 分钟。

3. 4℃ 10,000g 离心10 分钟。

4. 小心吸取上层水相(无色)加入到新试管中,同时计算所吸取的水相体积。不必过多吸取,防止吸入DNA和蛋白杂质(中间层,白色)。

5. 加入所吸取水相等体积预冷的异丙醇,盖紧管盖,轻轻摇匀。

6. 室温静置10 分钟,待RNA 充分沉淀(为减少RNA 降解,此步骤可省略)。

7. 4℃ 10,000g 离心10 分钟。

8. 将上清弃除(注意别丢弃沉淀),每管加入0.2体积75%乙醇润洗,盖紧管盖,轻轻晃动试管,以去除残留的异丙醇和盐份。4℃ 7,500g 离心5 分钟。

9. 将上清弃除(注意别丢弃沉淀),打开管盖,将RNA 沉淀干燥(室温挥发或真空干燥)。注意RNA 沉淀不可完全干燥,否则难以溶解。

10. 将RNA 沉淀溶解于适量的无RNase 水中。如果RNA 沉淀溶解不完全,将使OD260/OD280≤1.6。此RNA 溶液可用于进一步实验,或者-70℃保存。

实验结果

实验结果

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