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实验案例
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高通量组织研磨仪研磨果蝇的法和提取DNA的实验步骤
发布时间:2017-05-22 点击: 次   编辑:admin

实验目的

对果蝇进行研磨,提取其RNA。

实验原理

通过研磨珠的撞击,充分研磨果蝇,进而提取其RNA。

实验材料和器具

样品:果蝇

仪器:高通量组织研磨仪(上海净信,Tissuelyser-24)

耗材:离心管,不锈钢研磨珠(上海净信,6号)

实验步骤

1.取5-10只果蝇放入研磨管中,盖紧研磨管. 加入研磨珠,13单位振频,1min,充分匀浆(时间可根据样品本身的难易程度来调节,难磨的样品,可以延长时间,如一次运动两分钟还不是很充分,可以间隙的重复工作几次)

2.将研磨管放入高通量组织研磨仪中,60M/S研磨30S

3.机器停止后,取出研磨管,放入冷冻离心机中,于4度,10000g离心10分钟

4.小心吸取上清液0.1研磨单位至新的0.3研磨单位离心管中,盖上管盖,在室温上孵育15分种,使样品充分裂解至匀浆液较透明,如果仍有少量颗粒属于正常情况,不影响RNA提取质量和得率。

5.在0.3ML离心管中加入0.02研磨单位氯仿,盖紧管盖,振荡混匀并将其在冰上孵育15分种,于4度,12000g离心15分钟。离心后混合物分层:上清层,中间层,下层;RNA存在于上清层中。

6.将上清层小心转移到一干净的离心管中,加入等体积冰浴的异丙醇,颠倒振荡混匀,将混合的样品在-20度条件,孵育20分种,于4度,12000g离心10分钟。RNA沉淀通常形成片状沉淀附着于管壁或管底。

7.小心弃去上清,用0.2体积的冰浴75%的乙醇洗涤RNA沉淀一次,颠倒洗涤离心管管壁,并旋涡振荡样品,尽可能让沉悬浮,于4度,12000g离心5分钟,再次去除上清,晾干沉淀。

8.操作的最后,在阴凉处适度干燥RNA沉淀(避免过分干燥,那样会降底它的可溶性)。

9.用适量(一般可用0.01—0.02研磨单位)的无RNA酶水或TE溶液来溶解RNA。抽提好的RNA,保存于-70度。

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