所在位置:首页 > 新闻动态 > 技术知识 >

技术知识
联系方式
地址:上海市闵行区七莘路1839号财富108广场南楼2510室
电话:021-57790908
传真:021-54298177
网站:www.tuohe17.com
全自动样品冷冻研磨仪对拟南芥或水稻穗进行研磨破碎
发布时间:2017-05-26 点击: 次   编辑:admin

实验目的

对拟南芥或水稻穗进行研磨破碎,进而提取其DNA。

实验原理

通过研磨珠的撞击,充分拟南芥或水稻穗细胞,使其内容物流出,进而提取目标成分。

实验材料和器具

样品:拟南芥或水稻穗

仪器:全自动样品冷冻研磨仪(上海净信,Tissuelyser-48)

耗材:离心管,不锈钢研磨珠(上海净信)

试剂:TPS溶液(100mM Tris-Cl (pH 8.0),10mM EDTA (pH 8.0),1M KCl)

实验步骤

1.取一片拟南芥的叶片(或10d左右的小苗),加入两毫升EP管中。

2.加钢珠1颗

3.加TPS提取液0.02ml

4.设置研磨仪参数10单位频振,1min。(水稻嫩叶设置45S,12单位频振;老叶设置70S,12单位频振)

5.离心(4000rpm,1min),将打碎的组织和提取液一起转移至96孔板中。

6.96孔板加盖子,75°加热15min

7.大离心机最高转速10min

8.取上清,转入另一块96孔板,加入等体积的异丙醇。

9.加盖子,混匀

10.4°下10min或-20°下10min,如材料很多此步骤可省略。

11.最高转速离心10min。

12.弃上清,加入0.04ml 70%乙醇。

13.最高转速离心10min

14.弃去乙醇,37°放置20-30min烘干

15.加入0.016ml水,65°放置10min

16.离心除去气泡,之后可以直接用于PCR实验。

实验注意事项

1.-20°下该方法的DNA可以保存4个月以上,4°大致可以放2-3周。

上海净信实业发展有限公司提供专业均质器无菌均质器等实验室仪器设备。      沪ICP备14048887号-3    电话:021-57790908  传真:021-54298177      网站地图